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Decodificando a Espectrometria de Massas

Decodificando a Espectrometria de Massas: MSE
Parte 1

Por Alexandre F. Gomes
Especialista de Aplicações em Espectrometria de Massas

Waters Technologies do Brasil 

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Métodos de aquisição dependente de dados (DDA) permitem adquirir automaticamente espectros de fragmentação (MS/MS) para precursores isolados de acordo com critérios pré-definidos durante corridas de LC-MS. Porém, em amostras complexas contendo muitos íons sobrepostos, ocorre perda de informação (precursores não fragmentados) ou seleção de mais de um precursor em um mesmo espectro de fragmentação (dados de baixa qualidade).

Para superar essa limitação, a Waters desenvolveu um método de aquisição independente de dados (DIA) nomeado MSE, um método simples e genérico (untargeted) para aquisição de dados de forma compreensiva e completa.

Por MSE em instrumentos TOF e QTOF, todos os íons gerados na fonte são transmitidos até a cela de colisão, que alterna sequencialmente entre funções de baixa e alta energia, enviando alternadamente precursores e fragmentos ao analisador TOF.

Assim, são adquiridos dados de massa exata de precursores e fragmentos ao mesmo tempo (todos os dados, todo o tempo). Os dados são então processados por software para deconvolução, associando os fragmentos a seus precursores com base na separação cromatográfica de alta eficiência alcançada pela técnica de UPLC.

Em resumo, a aquisição DIA por MSpermite amostrar todos os íons em todo o tempo, com aquisição simples, genérica e fácil de configurar (defina faixa de m/z, energias de colisão, e pronto!). Para amostras complexas, a opção por MSfrente a DDA minimiza a perda de dados (precursores não fragmentados) e reduz a complexidade de espectros de fragmentação com sobreposição de íons, permitindo obter espectros de fragmentação de maior qualidade.

Referências e leitura complementar

Silva JC, Denny R, Dorschel CA, Gorenstein M, Kass IJ, Li G-Z, McKenna T, Nold MJ, Richardson K, Young P, Geromanos SJ. Quantitative Proteomic Analysis by Accurate Mass Retention Time Pairs. Analytical Chemistry 2005, 77, 2187-2200.

Silva JC, Gorenstein MC, Li G-Z, Vissers JPC, Geromanos SJ. Absolute Quantification of Proteins by LCMSE. Molecular & Cell Proteomics 2006, 5, 144-156.

Geromanos SJ, Vissers JPC, Silva JC, Dorschel CA, Li G-Z, Gorenstein MV, Bateman RH, Langridge JI. The detection, correlation, and comparison of peptide precursor and product ions from data independent LC-MS with data dependant LC-MS/MS. Proteomics 2009, 9, 1683-1695.